实验报告 1
实验名称
植物病害生防菌的分离、培养
实验目的
生防菌主要有细菌、放线菌和真菌三大类。植物病害生防
菌的分离培养是利用生防菌进行植物病害生物防治研究和应用
的前提。为了获得生防菌的纯培养，首先必须把目的生防菌分
离出来，再根据不同生防微生物生长所需营养和环境条件，使
其在平板培养基上形成菌落，从而获得纯培养物。
通过本实验学习生防菌的常规分离、培养和纯化技术，学
习从菌落及培养特征等方面区分细菌、放线菌和真菌的类别。
实验步骤
（一）土壤生防菌的分离和培养
1.土壤生防菌的分离
土壤稀释平板法是应用最广泛的一种分离和计数土壤中放
线菌、细菌和大量产孢真菌的方法。
① 取经过风干过筛后的土样 10 g，放入盛有 90 mL 无菌水
的三角瓶中，振荡约 20 min，使土与水充分混合，将菌分散，
制成 10-1 浓度土壤悬浮液。
② 在悬浮液沉降前吸 1 mL 加入另一盛有 9 mL 无菌水的三
角瓶中振荡摇匀，即为 10-2 浓度悬浮液。同样方法，逐级稀
释成不同的系列悬浮液。
③ 然后根据土样或所需分离的微生物，取一定稀释度的悬
浮液 0.1mL 加在已制好的平板培养基上，用玻璃刮铲将稀释液
在培养基上充分混匀铺平，倒置于 25~30℃恒温箱培养。
④ 根据不同微生物生长速度不同，分别于 2d，3d，5d 观
察记载分离结果。一般认为，每个平板上达到 50~150 个菌落
的适当分离稀释度为放线菌 10-3~10-4，细菌 10-5~10-6，真
菌 10-4~10-5。
分离一般真菌和细菌常用 PDA 培养基和牛肉膏蛋白胨琼脂
NA 培养基。有时为提高分离效果，可在 PDA 中加入 1000 mg/kg
链霉素等以抑制细菌生长，或在牛肉膏蛋白胨琼脂 NA 培养基
中加入五氯硝基苯等以抑制真菌生长。放线菌分离一般采用高
氏 1 号培养基。
2.土壤中生防菌的培养
分离于平板的生防细菌和放线菌，一般可置于 28℃（真菌
25℃左右）下培养，待长出菌落后，用接种环挑取菌落于平板
划线培养，再次形成菌落后，于斜面划线培养，置于 4℃冰箱
保存 。真菌用接种铲取菌落 边缘 ， 连 同培养基 转 入斜面培养，
产孢后置于 4℃冰箱 保存 。
（ 二 ）植物 体表 生防菌的分离和培养
1.生防菌的分离
（1）水 洗 法
① 取 叶片 5 ～ 10 张 ，在 自 来水下 冲去 浮土， 晾 干，用 打孔
